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qBac®系列杆状病毒表达载体

qBac-I

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Bacmid基本型,部分敲除了必需基因ORF1629,通过同源重组即可获得100%阳性重组病毒。适用于实验室一般性表达蛋白、研究杆状病毒基因功能等。

货号:10101  
规格 5 Reaction Kit/盒
单价(元/盒) 2500

文献:Zhao Y, Chapman DA, & Jones IM. 2003. Improving baculovirus recombination. Nucleic acids research, 31(2), e6-6. https://doi.org/10.1093/nar/gng006

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qBac-II

在qBac-I基础上筛选到的cathepsin缺失的毒株,用该载体表达的外源蛋白产量有显著提升,该载体尤其适用于分泌蛋白、膜蛋白和病毒样颗粒(VLP)的表达。

该产品已下架。

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qBac-III

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在qBac-II基础上进行了抗凋亡改造,将靶向昆虫Caspase-1的小RNA序列敲入p10位点,使病毒感染的Sf细胞(Sf9、Sf21...)和Tn细胞(High Five)抗凋亡,从而大幅度提高外源蛋白的产量。

货号:10301  
规格 5 Reaction Kit/盒
单价(元/盒) 5000

宿主凋亡是对抗病毒感染的策略之一。宿主在病毒感染后迅速启动细胞的凋亡通道,经过多级信号放大,最终使细胞凋亡,从而抑制了病毒的复制和扩散。我们针对昆虫细胞凋亡通路的第一个效应蛋白Caspase-1设计了一段双链小RNA,并把这段小RNA克隆到Bacmid上。当病毒进入宿主细胞后,小RNA通过宿主RNA聚合酶III转录,再通过宿主Dicer等酶的加工和装配,形成靶向宿主Caspase-1的siRNA,进而介导Caspase-1 mRNA的降解,最终导致宿主凋亡通路被阻断。宿主凋亡被抑制后,病毒表达的外源蛋白产量会显著提高。

我们设计的小RNA可以同时靶向Sf(如Sf9、Sf21)和Tn(如High Five)两种工业上常用的昆虫细胞系。

qBac-III与对照载体蛋白产量对比(考染)

Ctrl是不编码小RNA的Bacmid,其他遗传背景与qBac-III完全一致。白色箭头指示的是外源蛋白FluC。

qBac-IIII与对照载体蛋白活性对比

Ctrl是不编码小RNA的Bacmid,其他遗传背景与qBac-III完全一致。

从上图可以看出,qBac-III不仅仅提高了蛋白的产量,其生物学活性也同步提高,说明抗凋亡使细胞内蛋白质量控制系统持续工作。

专利:一种广谱抗凋亡杆状病毒表达载体(ZL201810640684.X)

文献:Zhang, X., Zhao, K., Lan, L., Shi, N., Nan, H., Shi, Y., Xu, X., & Chen, H. (2021). Improvement of protein production by engineering a novel antiapoptotic baculovirus vector to suppress the expression of Sf‐caspase‐1 and Tn‐caspase‐1. Biotechnology and Bioengineering, 1–13. https://doi.org/10.1002/bit.27807

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qBac-IIIG 推荐产品

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qBac-IIIG是qBac-III的绿色荧光版。我们将绿色荧光蛋白基因(GFP)敲入qBac-III染色体中,GFP基因由病毒的中等强度启动子控制,能直观看到是否产生重组病毒,并方便测定滴度。如果GFP的存在不影响后续工作,建议您选择使用qBac-IIIG。由于GFP插入位点敲除了两个病毒非必需基因,其产量高于qBac-III(提高约60%)。

货号:10302  
规格 5 Reaction Kit/盒
单价(元/盒) 5000

转染后不同时间出现荧光的细胞

最早可以在转染后36小时观察到微弱的绿色荧光

qBac-IIIG荧光亮度

qBac-IIIG重组病毒绿色荧光(左)与p10启动子表达的GFP荧光(右)强度对比

这个荧光强度既可以保证在荧光显微镜下观测到,又不会与晚期启动子竞争胞内资源

qBac-IIIG产量对比

qBac-IIIG与qBac-III表达量对比

在High Five细胞中表达荧光素酶(FluC),感染后第四天收集细胞。黑色箭头指示的是FluC。通过图像密度扫描定量,qBac-IIIG的产量比qBac-III提高了60%。

专利:一种广谱抗凋亡杆状病毒表达载体(ZL201810640684.X)

专利:一种高产杆状病毒表达载体(ZL201811607414.5)

文献:Zhang, X., He, A., Zong, Y., Tian, H., Zhang, Z., Zhao, K., Xu, X., & Chen, H. (2023). Improvement of protein production in baculovirus expression vector system by removing a total of 10 kb of nonessential fragments from Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus genome. Frontiers in microbiology, 14, 1171500. https://doi.org/10.3389/fmicb.2023.1171500

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Start Kit 新品

下载qBac-IIIG使用手册 下载pQB4 His-tag Kit使用手册

对于第一次使用qBac表达系统的客户,为了使您尽快构建杆状病毒表达平台,我们以优惠的价格推出了"启动套餐(Start kit)"。该套餐包含5反应的qBac-IIIG Bacmid和三种转移载体质粒(pQB4a、pQB4b和pQB4t)。本产品能解决您绝大多数的应用需求。

货号:30001

内含:qBac-IIIG 5 Reaction Kit 1盒;pQB4 His-tag Kit 1盒

价格:6000元

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重要提示:以上价格仅限实验室使用,工业用途请 联系我们 购买许可,详情请点击此链接