案例展示 @ Bacmid

Porcine Sapovirus VP1

Bacmid: qBac-IIIG

Transfer vecter: pQB4b

Cell line: Sf9

说明：胞内表达，六孔板贴壁培养。感染4天后收集细胞，直接裂解SDS-PAGE检测（Lane 1: Marker, Lane 2: Empty virus, Lane 3: VP1）。

Bacmid: qBac-IIIG

Transfer vecter: pQB3

Cell line: High Five

说明：胞内表达，VP2分子量为64.6 kDa，蛋白产量在感染后第六天到第七天依然有提高。细胞裂解后用蔗糖密度梯度离心，分层收集样品，电镜观察可见病毒样颗粒。

Bacmid: qBac-IIIG

Transfer vecter: pQB3

Cell line: Sf9

说明：胞内表达，直接裂解细胞检测具有非常高的酶活。（lane 1: Marker; lane 2,4,5: 脂肪酶及其突变体; lane 3: 一种同工脂肪酶）

Bacmid: qBac-III

Transfer vecter: pQB1064

Cell line: Sf9

说明：客户提供的P0代病毒感染的结果，病毒滴度未知，推测MOI偏低。

Bacmid: qBac-III

Transfer vecter: 自行构建

Cell line: Sf9

说明：细胞裂解后低速离心去除细胞碎片，然后超离获得沉淀，沉淀重悬后电镜观察。

说明：细胞裂解后低速离心去除细胞碎片，上清亲和层析纯化后电镜观察。ITR+外源基因=1778nt，所以含有单链DNA的AAV粒子看起来不饱满。

说明：另一批次细胞裂解后低速离心去除细胞碎片，上清亲和层析纯化后电镜观察。可以清楚地看到空壳率很低。

Bacmid: qBac-IIIG

Transfer vecter: pQB3

Cell line: Sf9

说明：3升发酵罐装量1升，接种病毒3天后放罐收集发酵液上清，直接用于检测内毒素。2 uL发酵液就可以支持一个检测反应，灵敏度达到0.05 EU/mL。