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qBac系列杆状病毒表达载体

qBac-I

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Bacmid基本型,部分敲除了必需基因ORF1629,通过同源重组即可获得100%阳性重组病毒。适用于实验室一般性表达蛋白、研究杆状病毒基因功能等。

规格 5 Reaction Kit 10 Reaction Kit 20 Reaction Kit
价格(CNY) 2500 4500 8000

参考文献:Zhao Y, Chapman DA, & Jones IM. 2003. Improving baculovirus recombination. Nucleic acids research, 31(2), e6-6.

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qBac-II

在qBac-I基础上筛选到的cathepsin缺失的毒株,用该载体表达的外源蛋白产量有显著提升,该载体尤其适用于分泌蛋白、膜蛋白和病毒样颗粒(VLP)的表达。

规格 5 Reaction Kit 10 Reaction Kit 20 Reaction Kit
价格(CNY) 已下架 已下架 已下架

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qBac-III

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在qBac-II基础上进行了抗凋亡改造,将靶向昆虫Caspase-1的小RNA序列敲入p10位点,使病毒感染的Sf细胞(Sf9、Sf21...)和Tn细胞(High Five)抗凋亡,从而大幅度提高外源蛋白的产量。

规格 5 Reaction Kit 10 Reaction Kit 20 Reaction Kit
价格(CNY) 5000 9000 16000

宿主凋亡是对抗病毒感染的策略之一。宿主在病毒感染后迅速启动细胞的凋亡通道,经过多级信号放大,最终使细胞凋亡,从而抑制了病毒的复制和扩散。我们针对昆虫细胞凋亡通路的第一个效应蛋白Caspase-1设计了一段双链小RNA,并把这段小RNA克隆到Bacmid上。当病毒进入宿主细胞后,小RNA通过宿主RNA聚合酶III转录,再通过宿主Dicer等酶的加工和装配,形成靶向宿主Caspase-1的siRNA,进而介导Caspase-1 mRNA的降解,最终导致宿主凋亡通路被阻断。宿主凋亡被抑制后,病毒表达的外源蛋白产量会显著提高。

我们设计的小RNA可以同时靶向Sf(如Sf9、Sf21)和Tn(如High Five)两种工业上常用的昆虫细胞系。

qBac-III在Sf9和HI5细胞中的表达量

qBac-III在两种细胞系(Sf9, High Five)中蛋白产量对比(考染)

Ctrl是不编码小RNA的Bacmid,其他遗传背景与qBac-III完全一致。白色箭头指示的是外源蛋白FluC。

qBac-III在sf9和Hi5中表达荧光素酶活性对比

qBac-III在两种细胞系(Sf9, High Five)中蛋白活性对比

Ctrl是不编码小RNA的Bacmid,其他遗传背景与qBac-III完全一致。

从上图可以看出,qBac-III不仅仅提高了蛋白的产量,其生物学活性也同步提高,说明抗凋亡使细胞内蛋白质量控制系统持续工作。另外,qBac-III病毒蛋白产量在感染后第五天依旧保持上升的趋势。

专利:一种广谱抗凋亡杆状病毒表达载体

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qBac-IIIG 新品上市

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qBac-IIIG是qBac-III的绿色荧光版。我们将绿色荧光蛋白基因(GFP)敲入qBac-III染色体中,GFP基因由病毒的中等强度启动子控制,能直观看到是否产生重组病毒,并方便测定滴度。如果GFP的存在不影响后续工作,建议您选择使用qBac-IIIG。由于GFP插入位点敲除了两个病毒非必需基因,其产量高于qBac-III(提高约60%)。

规格 5 Reaction Kit 10 Reaction Kit 20 Reaction Kit
价格(CNY) 5000 9000 16000

转染后不同时间出现荧光的细胞

最早可以在转染后36小时观察到微弱的绿色荧光

qBac-IIIG荧光亮度

qBac-IIIG重组病毒绿色荧光(左)与p10启动子表达的GFP荧光(右)强度对比

这个荧光强度既可以保证在荧光显微镜下观测到,又不会与晚期启动子竞争胞内资源

qBac-IIIG产量对比

qBac-IIIG与qBac-III表达量对比

在High Five细胞中表达荧光素酶(FluC),感染后第四天收集细胞。黑色箭头指示的是FluC。通过图像密度扫描定量,qBac-IIIG的产量比qBac-III提高了60%。

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重要提示:以上价格仅限实验室使用,工业用途请 联系我们 购买许可。

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